pPB（CSRNLIDC）是一个二硫键锁定的八元环肽，靶向血小板衍生生长因子受体β（PDGFR-β）。PDGFR-β在活化肝星状细胞、肿瘤相关成纤维细胞和周细胞表面高表达，这决定了pPB在靶向递送和分子识别研究中的核心价值。

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一、它靶向谁：PDGFR-β高表达细胞图谱

PDGFR-β在静息态细胞中表达较低，在特定活化状态下被显著上调。

pPB的靶向逻辑不是“识别某种组织”，而是“识别进入活化状态的细胞”。

具体可关注以下几类细胞：

1.活化肝星状细胞：

是pPB靶向递送研究中最常用的模型之一，常用于肝纤维化相关细胞研究、载体摄取验证和siRNA递送评价。pPB对活化肝星状细胞的识别具有较好的状态选择性。

2.肿瘤相关成纤维细胞：

pPB可用于修饰纳米载体，提高其在肿瘤基质区域的富集和摄取，适合肿瘤微环境靶向递送研究。这类细胞是pPB在肿瘤基质方向的重要靶点之一。

3.周细胞：

周细胞分布于血管周围，PDGFR-β是其重要表面标志之一。

利用pPB修饰载体，可开展血管周细胞靶向载体设计，考察载体与周细胞之间的识别和结合行为。周细胞靶向有助于研究载体在血管周围的分布和滞留。

4.活化肺成纤维细胞：

可作为pPB靶向研究的细胞模型，用于肺纤维化相关细胞模型研究及靶向递送验证。该模型适合评估pPB在肺相关活化细胞中的识别效率。

Arg3和Ile5是pPB与PDGFR-β结合的关键残基，偶联时需避免遮挡这两个位点。

此外，Cys1和Cys8形成的二硫键是维持环状构象的基础，若在偶联或储存过程中断裂，线性化pPB与PDGFR-β的亲和力会大幅下降。

二、四种用法：从脂质体到分子探针

用法一：DSPE-PEG-pPB修饰脂质体

最成熟的方案。DSPE疏水尾插入脂质双分子层，PEG提供间隔臂，pPB暴露在表面识别PDGFR-β。

关键参数：

·偶联化学：DSPE-PEG-NHS与pPB的N端氨基缩合，或DSPE-PEG-Mal与Cys巯基加成；

·修饰密度：总脂质:pPB偶联物摩尔比100:2–100:3为较佳窗口；

·PEG链长：PEG2000适配100 nm脂质体，PEG3400/5000适合受体空间位阻较大的体系。

用法二：pPB修饰LNP递送siRNA

将pPB整合到脂质纳米颗粒中，靶向活化肝星状细胞递送siRNA。典型设计为pPB-SNALP，粒径110–130nm，zeta电位近中性，负载HSP47siRNA。

操作要点：

·脂质组成：可电离脂质+胆固醇+DSPC+PEG-脂质为基本组成，pPB-PEG-脂质掺入外层作为靶向组分。

·siRNA包载：可电离脂质在中性pH下与带负电的siRNA形成静电复合物，包载效率通过改变可电离脂质与siRNA的N/P比优化，通常N/P=4–8为较佳范围。

用法三：pPB修饰NLC递送小分子

pPB修饰的纳米结构脂质载体（NLC）负载小分子化合物，固态脂质核心提供更缓慢的释放动力学。

DSPE-PEG2000-pPB可用于构建针对活化肝星状细胞的脂质体、纳米粒或胶束载体。

用法四：游离环肽做分子识别探针

pPB游离环肽用于SPR或ITC实验，考察CSRNLIDC与PDGFR-β胞外域的结合动力学。

构象受约束的环肽比线性肽结合常数更可靠，因为环化大幅减少了构象熵损失。

固定化时优先选择N端或C端定向偶联，避免遮挡Arg3和Ile5。

三、偶联化学怎么选：NHSvsMalvs点击化学

pPB的偶联路线选择，取决于载体表面官能团、pPB上可用的反应位点，以及实验对定点偶联的要求。常见策略可归为以下四类：

1.NHS-酰胺缩合：

利用DSPE-PEG-NHS与pPB的N端氨基反应。

·优势是反应温和、条件简单，适合大多数常规偶联场景。

·需要注意的是，该路线要求pPB的N端保持游离，偶联后不能遮挡N端区域，否则可能影响结合活性。

2.Mal-巯基加成：

利用DSPE-PEG-Mal与pPB的Cys巯基发生加成反应。

·优势是定点偶联、选择性好，适合对偶联位点有明确要求的体系。

·需要注意的是，该路线要求Cys1或Cys8的巯基处于还原态，环化后不能完全氧化封闭，否则无法完成偶联。

3.点击化学：

利用Alkyne-PEG-pPB与叠氮化物进行CuAAC反应。

·优势是正交反应、生物相容性好，适合在复杂体系中实现定点标记。

·需要注意的是，反应需要铜催化剂，铜离子可能对部分肽的构象或活性产生影响，需在反应后充分去除。

4.生物素-链霉亲和素：

利用生物素化pPB与链霉亲和素载体结合。

·优势是高亲和力、定向固定，适合SPR芯片或亲和捕获实验。

·需要注意的是，该路线需要额外的生物素标记步骤，会增加一步纯化。

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